產(chǎn)品介紹

基 因 型F- mcrA mcrB, IN(rrnD-rrnE)1 rnc14::Tn10(DE3 lavUV5::T7 polymerase)簡 要 說 明 HT115(DE3)菌株是一類特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株，可以飼喂線蟲，主要用于秀麗隱桿線蟲（C. elegans）的RNAi干擾試驗。該菌株可以在LB或2YT培養(yǎng)基中正常生長，Tn10轉(zhuǎn)座子的存在使其具有四環(huán)素抗性。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，在IPTG存在時可誘導T7 RNA聚合酶大量表達，進而啟動線蟲ds RNA的表達)，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，除了用于線蟲RNAi干擾試驗，也可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。HT115(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達0.5×108 cfu/μg DNA。操 作 說 明1. HT115(DE3)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液，37℃，200 rpm復蘇60分鐘。4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上。5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。注 意 事 項1. 感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。3. 誘導時，IPTG濃度可根據(jù)實驗選擇使用（0.1-10mM）。4. 進行線蟲RNAi質(zhì)粒轉(zhuǎn)化時，抗生素使用濃度可參考：氨芐—50ug/ml，四環(huán)素—12.5ug/ml。5. 若進行蛋白表達，為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

此產(chǎn)品需要干冰運輸發(fā)貨，會根據(jù)路途及包裝大小收取一定的干冰運費。